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                科技服务 > 功能机制研究服务 > 原位杂交实验

                原位杂交实验

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                原位杂交(in situ hybridization, ISH)是用标记的DNA或RNA为探针,根☆据碱基互补配对原则,在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据探针的标记物是否①直接被检测,原位杂交可分♀为直接法和间接法。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交,通过放射自显↙影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法用半抗原标记探¤针,通过免疫组织化学法对半抗原定位,间接显示探针与靶核酸形成的杂交体。非放射性ω标记的原位杂交具有安全、经济、灵敏□ 度高等优点,因而生物素标记探针digaoxin标记探针迅速发展。
                标记探针迅速发展。
                1、原位杂交(digaoxin)实验流程
                1. 蛋白酶K处理

                2. 预杂交

                3. 探针变性

                4. 杂交

                5. 洗涤

                6. 消化残余的RNA

                7. 封闭液封闭30min。

                8. 抗体孵育1~2h。

                9. 洗涤

                10. 显色BCIP/NBT显色∑ 液加至标本上避光显色20min。若无背景出现可继续显色过夜。

                11. 核固红复染,充分自来水ㄨ冲洗。

                12. 梯度乙醇脱水,二甲苯透明,中性树脂封◣片,光镜观察拍照。


                 
                2、荧光原位杂交实验流程(FISH)
                1、脱蜡
                2、蛋白酶处理
                3、变性
                4、杂交
                5、杂交后水洗
                6、检测
                7、扩增
                8、DAPI封片,荧光显微镜拍照。


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