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                科技服务 > 分子机制研究服ζ 务 > ChIP染←色质免疫共沉淀

                ChIP染色质→免疫共沉淀

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                提供商:上海英拜生物科▓技有限公司
                地区:上海
                服务名称:ChIP染色质免疫共沉淀
                简介:染色质免疫共沉淀ChIP实验服务

                 染色质免疫共沉淀

                         研究蛋白质与DNA在染色质环境下的相互作用╲是阐明真核生物基因表达机制的基本途径。染色质免疫沉∞淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相』互作用的方法。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并※将其随机切断为一定长度范围内的染色质小片段,然∏后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富集目的蛋白结合的DN***段,通过对目的片断的纯化与检测,从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。CHIP不仅可以〓检测体内反式因子与DNA的动态作用,还可以用【来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。

                ChIP实验操作流◇程:
                1、样品准备与交联
                细胞收集〖后,用1%的formaldehyde处理细胞,交联核酸与DNA结合蛋白;
                2.超声打断※染色质
                裂解细胞,用超声波将染色质超声破碎成200-1000bp片断;将片⊙段分为两份,一份用于免疫共沉淀,一份用于对照。
                     
                                      
                           

                     图1染色质免疫共沉淀实→验流程           图2 超声破碎后DNA电泳图(lane2) 

                3、免疫共沉淀(IP) 
                取B步骤所得一份片断与ChIP特异抗体结︾合进行免疫共沉淀,利用免疫磁珠法富集抗体复合物。
                4、解¤交联及纯化DNA
                将富集的DNA/蛋白复合物解交联释放DNA片段,并■进行纯化(IP DNA);B步骤所得用于对照(Input DNA)的片断作不ω进行IP实验,但也要解交联并纯化。
                5、DNA段PCR扩增
                针对ChIP DNA, Input DNA及对照DNA的目的片段设计特异性引物并进行荧光定量PCR扩增。
                 6、结果分析
                %Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%
                Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)]

                资料下载: 染色质免疫共沉淀实验.doc 附件下载  染色质免疫共沉淀(ChIP)实验.doc 附件下载

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