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                科技服务 > 分子机制研究服务 > ChIP染色质免疫共沉淀

                ChIP染色质免疫共沉淀

                ChIP染色质免疫共沉淀
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                 染色质免疫共沉淀

                研究蛋白质ω 与DNA在染色质环境下的相互作用是阐明真核生物基因表○达机制的基本途径。染色质免●疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay, CHIP)是目前唯一研究体内DNA与蛋白质相互作用的方法∏。它的基本原理是在活细胞状态下固定蛋白质-DNA复合物,并将其随机切断为一定长度范围▆内的染色质小◥片段,然后通过免疫学方法沉淀此复合体,特异性地富№集目的蛋白结合的DN***段,通过对目的㊣片断的纯化与检测,从而获→得蛋白质与DNA相互作用的信息】。CHIP不仅可以检测体内反式因子↑与DNA的动态作用,还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰与基因表达的关系。

                ChIP实验操作流程:
                1、样品⊙准备与交联
                细胞收集后,用1%的formaldehyde处理细胞,交联核酸与DNA结合蛋白;
                2.超声打断染色】质
                裂解细胞,用超声波将染色质超声〇破碎成200-1000bp片断;将片段分为两份,一份用于免疫共沉淀,一份用于对照。
                     

                                     
                          

                     图1染色质免疫共沉淀实验流程           图2 超声破碎后DNA电泳图(lane2) 

                3、免疫共沉淀(IP)
                取B步骤所得一份片断与ChIP特异抗体结合进行免疫共沉淀,利用免疫磁珠法富集抗体复合物。
                4、解交联及纯◥化DNA
                将富集的DNA/蛋白复合物解交联释放DNA片段,并进№行纯化(IP DNA);B步骤所得用于对照(Input DNA)的片断作不进行IP实验,但也要解交联并纯化。
                5、DNA段PCR扩增
                针对ChIP DNA, Input DNA及对照DNA的目的片段设计特异性引物并进行荧光定量PCR扩增。
                 6、结果分析
                %Input=2(CtInput-CtChIP)×Fd×100%
                Fold Enrichment = [%(ChIP/Input)] / [%( Negative control/Input)]


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